Проба Кумбса - это специфический лабораторный тест, который позволяет определить антитела, находящиеся в или на поверхности эритроцита. Данная процедура позволяет диагностировать иммунную в том числе у новорожденных, а также выявить гемолитические трансфузионные реакции. Проба Кумбса активно применяется в судебной медицине и научной генетике с целью определения эритроцитарных антигенов. Соблюдение всех правил осуществления такого анализа позволяет получить максимально достоверный результат.

Цель антиглобулинового теста

Проба Кумбса прямая позволяет обнаружить антиэритроцитарные антитела, которые фиксируются на эритроцитах. Положительная реакция при подобном исследовании указывает на развитие аутоиммунной Следует отметить, что отрицательный результат не исключает наличия поскольку антитела нередко находятся в свободном виде, то есть не имеют связи с эритроцитами. В таких случаях целесообразно провести непрямую пробу Кумбса, которая позволит определить автономные вещества в

Как проводится анализ?

абор венозной крови у пациента осуществляют утром натощак, несмотря на то, что каких-либо существенных факторов, влияющих на конечный результат подобного теста, не обнаружено. Хранить взятый материал разрешается при температуре от 2 до 8 °С не дольше семи дней. Для того чтобы показатели данного исследования были максимально точны, цельную кровь в течение первых двух часов необходимо доставить в лабораторию. В идеале проба Кумбса должна показывать отрицательный результат, что указывает на отсутствие гемолитических изменений в организме.

Расшифровка итоговых показателей

Проба Кумбса является достаточно трудоемким методом исследования, который требует тщательного и точного выполнения. При использовании такого теста могут встречаться некоторые сложности, которые связаны с неправильной интерпретацией окончательных результатов по причине слабого проявления положительных реакций. Следует отметить, что недостоверность анализа - а именно положительная проба Кумбса - может стать следствием неэффективной отмывки эритроцитов, контакта с жирной
поверхностью, а также нейтрализации антиглобулиновых реагентов компонентами

сыворотки. Еще одним недостатком такого метода исследования является нестойкость взятого материала, хранение которого имеет определенные особенности.

Причиной ложноотрицательного результата может стать чрезмерное встряхивание взвеси эритроцитов при ресуспендировании. Ошибочные результаты могут быть также обусловлены присутствием примесей антикомплементарных антител, которые адсорбируются при инкубации на поверхности тестируемых эритроцитов, в результате чего создается видимость положительного результата. Если тщательно отмывать исследуемые образцы и контролировать условия проведения реакции, указанные недостатки могут быть легко устранены, что повысит шансы на получение максимально достоверных показателей пробы Кумбса.

Прямая проба Кумбса . С помощью этой пробы доказывают наличие фиксированных эритроцитами ребенка блокирующих антител. Положительная прямая проба свидетельствует о сенсибилизации и служит убедительным признаком гемолитической болезни новорожденного еще до появления других клинических признаков. Как исключение и только в очень тяжелых случаях прямая проба Кумбса может оказаться отрицательной в связи с уже наступившим, почти полным гемолизом сенсибилизированных эритроцитов.

Прямая проба Кумбса выполняется следующим образом: 5 капель крови, взятой из пятки ребенка, помещают в пробирку и добавляют 5 мл физиологического раствора. Хорошо размешивают и центрифигуриуют в течение 10 мин. Отделяют прозрачную жидкость над осадком эритроцитов. Затем снова добавляют 5 мл физиологического раствора, смешивают и центрифигурируют. После трехкратного смешивания с физиологическим раствором эритроциты хорошо промыты. После последнего отделения надосадочной жидкости эритроцитный осадок в количестве 0,1 мл смешивают с 0,9 мл физиологического раствора. Наносят 2-3 капли этой смеси на предметное стекло и добавляют одну каплю сыворотки Кумбса. Наличие агглютинации указывает на то, что реакция положительна, (положительная прямая проба Кумбса). Исследование следует проводить при комнатной температуре выше 16°, чтобы избежать действия Холодовых агглютининов.

Непрямая проба Кумбса служит доказательством наличия свободных антител в сыворотке матери и выполняется с сывороткой крови матери.

Гемолитическая болезнь у новорожденного при Rh-несовместимости проявляется обыкновенно после второй беременности. Первый ребенок рождается здоровым, второй с признаками слабо выраженной анемии и только после третьей беременности рождаются дети с явными признаками гемолитической болезни. Только у предварительно сенсибилизированных женщин еще при первой беременности может родиться ребенок с симптомами гемолитической болезни. В некоторых случаях иммунизация вызывает аборты и рождение мертвых детей. Для начала и тяжести заболевания имеют значение состояние плаценты и продолжительность воздействия материнских агглютининов на плод. При появлении агглютининов за 10-14 недель до родов у ребенка обычно наблюдаются субклинические формы. Раннее появление агглютининов, за 15-26 недель до родов, вызывает тяжелые формы заболевания. При всех формах заболевания основным процессом является гемолиз. Последствие реакции антиген - антитело - гемолиз, поражение печеночных и мозговых капилляров. В зависимости от того, какое поражение преобладает, наблюдаются и различные формы заболевания. Опасны и некоторые анафилактические явления. Они приводят к образованию гистаминоподобных субстанций, вызывающих тяжелейшие поражения печеночной клетки и особенно ганглионарных клеток базальных ядер, аммонового рога, продолговатого мозга и даже коры головного мозга. При поражении печеночных клеток к экстрагепатальной желтухе добавляется и гепатальная. Дети погибают при тяжелых явлениях ядерной желтухи. Если они выживают, остаются симптомы поражений нервной системы (нарушения со стороны экстрапирамидальной системы с хореоатетозными движениями, своеобразной танцующей походкой, принудительными движениями головы, иногда расстройство координации произвольных движений с частым падением, повышенным тонусом мышц, умственной отсталостью, т. е. с признаками так наз. encephalopathia posticteria infantum).

Проба Кумбса – анализ для выявления антител прикрепленных к поверхности или растворенных в плазме. С его помощью выявляют иммунизированность и антитела к эритроцитам. Второе название антиглобулиновый тест. Бывает прямым и непрямым.

При прямом антиглобулиновом тесте определяет антитела фиксированные на поверхности эритроцитов. Проводится при подозрении на , при других аутоиммунных заболеваниях, после приема лекарств (метилдопа, пенициллин, хинин) и .

Эритроциты были сенсибилизированы in vivo – к ним уже прочно прикреплены антитела, а добавление антиглобулиновой сыворотки (анти-IgG) вызывает склеивание сенсибилизированных клеток, что и видно невооруженным глазом.

Непрямая проба Кумбса выявляет антиэритроцитарные антитела в плазме крови, ее выполняют перед переливанием крови и при .

Антиэритроцитарные антитела - вид аутоантител, т.е. антител против собственных же тканей. Аутоантитело возникает при патологической реактивности иммунной системы на некоторые препараты, например, на высокие дозы пенициллина.

Эритроциты на своей поверхности содержат различные химические структуры (гликолипиды, сахариды, гликопротеины и протеины), в медицине именуемые антигенами. Человек наследует от родителей определенную карту антигенов на каждой красной клетке крови.

Антигены объединены в группы и подле этого кровь делят на несколько групп - по системе AB0, резус, Келл, Левис, Кидд, Даффи. Самые известные и значимые в работе врача - AB0 и резус-фактор (Rh).

Система AB0

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD , а если его нет – о резус-отрицательной Rhd .

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – произойдет гемолиз .

Показания

Главное показание к прямому антиглобулиновому тесту - подозрение на гемолитическую анемию. Наиболее часто его проводят при первичной аутоиммунной гемолитической анемии, гемолизе при ревматических, опухолевых, инфекционных заболеваниях, гемолизе, вызванном лекарствами.

Если анемия появилась спустя несколько дней или месяцев после переливания крови или при длительной желтухе у новорожденого также делают прямую пробу Кумбса.

Непрямой антиглобулиновый тест выполняют перед переливанием крови и при беременности резус-отрицательной женщины.

Аутоиммунная гемолитическая анемия

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная) – классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Нарушено взаимодействие внутри иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. В лимфоузлах синтезируются антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), которые присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу.

Первые симптомы обусловлены как разрушением эритроцитов, так и уменьшением гемоглобина. Среди них:

• усталость, общая слабость, раздражительность
• одышка
• боль в животе и груди, тошнота
• темный цвет мочи
• боли в спине
• желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
• снижение количества эритроцитов и в

Положительный результат прямой пробы Кумбса на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат - не дает возможности снять диагноз.

Вторичная гемолитическая анемия

Вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия и положительная проба Кумбса могут быть при следующих заболеваниях:

• синдром Эванса
• инфицирование пневмонии

Положительный антиглобулиновый тест при данных заболеваниях является одним из симптомов, а не критерием диагноза.

Гемолитическая болезнь новорожденного

Причина гемолитической болезни новорожденных - несовместимость группы крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных - по системе АВ0, казуистично - по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки - роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но последующие чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

Симптомы гемолитической болезни новорожденного:

• желтушность кожи
• , и слизистых
• увеличение печени и селезенки
• нарушения дыхания
• отек всего тела
• возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Анемия после переливания крови

Непрямую пробу Кумбса проводят перед переливанием крови для оценки совместимости, а прямую пробу Кумбса - после него при подозрении на посттрансфузный гемолиз, т.е. при наличии симптомов, таких как лихорадка, поливость (читай ниже). Цель анализа – выявить антитела к перелитым эритроцитам, которые связались с эритроцитами получившего кровь и являются причиной посттрансфузного гемолиза, а также преждевременного удаления донорских эритроцитов из кровообращения у реципиента (того, кто получил кровь).

Симптомы:

• повышение температуры тела
• сыпь на коже
• боли в спине
• красная
• тошнота
• головокружение

Расшифровка

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие - расположение антител - в крови или уже на эритроците.

• если прямая проба Кумбса отрицательна – значит на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов следует искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
• если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней - 3 месяца)
• положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании длится месяцы и даже годы

Норма

• прямая проба Кумбса - отрицательно
• непрямая проба Кумбса - отрицательно

Качественно положительный результат измеряется в количестве плюсов от одного до четырех (+, ++, +++, ++++), а количественно в цифровом виде - 1:16, 1:256 и т.д.

Да. О том, что Вы получили трансфузию крови обязательно должен знать Ваш врач, поскольку она влияет на правильность расшифровки результатов анализов сейчас. При получении чужой (хоть и много раз проверенной крови) всегда существует вероятность того, что ваше тело выработает антитела против перелитой крови. Именно данные антитела окажут отрицательное влияние на состояние здоровья. При последующих переливаниях крови врач должен знать о том, что Вы уже получали трансфузии, а значит было время для синтеза антител. Для беременных женщин данная информация еще более актуальна.

3. Если несоответствие по резус-фактору между матерью и ребенку, будут ли больны все дети?

Зависит на резус-положительности или отрицательности ребенка (RhD). Носители группы крови I, II, III и IV могут быть как резус-положительны, так и отрицательны. В ситуации когда мать резус-отрицательна, а ребенок резус положителен – антитела будут вырабатываться уже с первой беременностью, но только после первых родов (или прерывания беременности) произойдет прямой контакт крови матери и ребенка. Реализация гемолитического влияния антител будет только при вторых и следующих родах, что приведет к гемолитической болезни у новорожденного.

Каждая женщина с отрицательным резус-фактором должна быть тщательно обследована во время беременности, а после родов проводится профилактическое лечение для предупреждения появления антител и дальнейших осложнений.

4. Во время беременности нужно ли знать группу крови мужа перед проведением пробы Кумбса?

Нужно не просто знать, но еще и проверить группу крови биологического отца ребенка во время беременности.

Факты

• предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
• порог чувствительности - не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
• число антител запускающих гемолиз - индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
• динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне

Проба Кумбса was last modified: Март 16th, 2018 by Мария Бодян

Реакция Кумбса - эффективный метод выявления антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител крови человека в непрямой реакции агглютинации. Основа теста - использование при типировании антигенов эритроцитов специфических моноклональных реагентов на основе иммуноглобулинов класса G (IgG) с последующим применением на втором этапе реакции антиглобулиновой сыворотки Кумбса (АГС).

АГС производится путем смешивания сыворотки из крови лабораторных животных, иммунизированных иммуноглобулинами класса G человека, и моноклональных антител к одному из компонентов - C3D комплементу сыворотки человека. АГС вызывает агглютинацию эритроцитов, сенсибилизированных специфическими антителами. При отсутствии антител на эритроцитах под воздействием АГС положительная реакция не происходит.

Непрямая реакция Кумбса позволяет определить наличие:

• антигенов эритроцитов, выявляемых IgG-реагентами («неполными» антителами, например, моноклональными реагентами анти-D, анти-F Y a , анти-F Y b);
• антиэритроцитарных антител класса IgG.

Непрямой антиглобулиновый тест: выявление антигенов эритроцитов

Приводим методику непрямой реакции Кумбса на примере цоликлона анти-D IgG.

1. Промаркируйте чистую пробирку: укажите ФИО исследуемого лица.
2. Внесите в пробирку 2 капли (приблизительно 0,1 мл) цоликлона анти-D IgG.
3. Добавьте 2 капли 5 % взвеси предварительно отмытых физиологическим раствором анализируемых эритроцитов. Смешайте исследуемые образцы с цоликлоном.
4. Инкубируйте смесь на водяной бане или в термостате при 37 °С на протяжении 30 минут.
5. Добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 - 10 мл физраствора.
6. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g при 18 - 25 °С на протяжении одной минуты.
7. Удалите физраствор.
8. Повторно проведите процедуру отмывки эритроцитов с помощью центрифугирования еще 2 - 3 раза.
9. Добавьте 2 капли антиглобулиновой сыворотки к осадку кровяных телец, выполните перемешивание.
10. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g в течение минуты при температуре 18 - 25 °С.
11. Добавьте с помощью дозатора или пастеровской пипетки 3 - 5 капель физраствора.
12. Ресуспендируйте осадок и визуально оцените наличие агглютинации. Выраженные агглютинаты на дне пробирки на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена эритроцитов. Непрозрачная суспензия кровяных телец говорит об отсутствии антигена.

Реакция Кумбса: скрининг изоиммунных антиэритроцитарных антител

Исследование осуществляется в рамках проведения пробы на индивидуальную совместимость по всем антигенам эритроцитов крови донора и реципиента. Заключение о полной совместимости сыворотки реципиента с эритроцитами донора производят на основании отсутствия гемолиза и/или агглютинации на всех этапах проведения анализа. Признаки гемолиза и/или агглютинации на каком-либо этапе тестирования говорят о несовместимости образцов крови.

Оценка совместимости по системе АВ0, обнаружение «холодовых» антител

1. Приготовьте образец крови донора:
   • внесите в пробирку автоматическим дозатором 0,2 мл крови;
   • 3 раза отмойте эритроциты в 5,0 мл физиологического раствора;
   • ресуспендируйте осадок в 3 - 4 мл раствора с низкой ионной силой LISS.
2. Промаркируйте вторую чистую пробирку: укажите ФИО реципиента и ФИО донора.
3. Внесите автоматическим дозатором 0,1 мл сыворотки реципиента в промаркированную пробирку.
4. Добавьте 2 капли 5 % суспензии эритроцитов в растворе LISS.
5. Без промедления центрифугируйте смесь с центробежным ускорением 1200 g при температуре 18 - 25 °С на протяжении 15 - 20 секунд.
6. Легким покачиванием пробирки отделите осадок от дна. Оцените наличие агглютинатов. Присутствие гемолиза и/или агглютинатов означает:
   • несовместимость по системе АВ0;
   • наличие в сыворотке больного «холодовых» антител класса IgM или IgА, не специфичных к антигенам АВ0.

Выявление «тепловых» антител

1. При отсутствии гемолиза и/или агглютинатов инкубируйте пробирку 10 - 15 минут при 37 °С.
2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 - 20 секунд при комнатной температуре.
3. Встряхните пробирку и проверьте наличие гемолиза и/или агглютинатов в супернатанте. Положительный результат говорит об обнаружении в сыворотке больного «тепловых» IgM-антител против антигенов эритроцитов донора.

Обнаружение IgG-антител в тесте Кумбса

1. При отрицательном результате на прошлом этапе исследования добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 мл 0,9 % раствора NaCl.
2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 - 20 секунд при температуре воздуха 18 - 25 °С. Пастеровской пипеткой аккуратно избавьтесь от супернатанта.
3. Повторно выполните отмывание эритроцитов еще 2 - 3 раза.
4. Добавьте в пробирку 1 - 2 капли антиглобулиновой сыворотки. Выполните тщательное перемешивание.
5. Центрифугируйте пробирку при 1200 g 15 - 20 секунд.
6. Аккуратно разбейте осадок эритроцитов и проведите визуальную оценку результата реакции. Выявление агглютинации означает присутствие в сыворотке больного IgG-антител против антигенов эритроцитов донора.

Реакция Кумбса

Реакция Кумбса - антиглобулиновый тест для определения неполных антиэритроцитарных антител. Тест Кумбса используется для выявления антител к резус-фактору у беременных женщин и определения гемолитической анемии у новорождённых детей с резус-несовместимостью, влекущей разрушение эритроцитов . Данный метод был предложен английским врачом Робертом Кумбсом в 1945 году, в связи с чем впоследствии получил название «реакция Кумбса».

Прямая реакция Кумбса

Антитела , находящиеся на поверхности эритроцитов, могут быть как в статичном, так и в свободном состоянии в плазме крови . В зависимости от состояния антител проводится прямая или непрямая реакция Кумбса. Если есть основания для предположения, что антитела зафиксированы на поверхности эритроцитов, проводится прямой тест Кумбса. В этом случае тест проходит в один этап - добавляется антиглобулиновая сыворотка. Если на поверхности эритроцитов присутствуют неполные антитела, происходит агглютинация эритроцитов.

Непрямая реакция

Непрямая реакция Кумбса протекает в 2 этапа. Сначала необходимо искусственно осуществить сенсибилизацию эритроцитов. Для этого эритроциты и исследуемую сыворотку крови инкубируют, что вызывает фиксацию антител на поверхности эритроцитов. После чего проводится второй этап теста Кумбса - добавление антиглобулиновой сыворотки.

Примечания

Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Реакция Кумбса" в других словарях:

РЕАКЦИЯ КУМБСА - (Coombs test) метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых… … Толковый словарь по медицине

Метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых наблюдается… … Медицинские термины

- (антиглобулиновал проба) метод обнаружения естественно или искусственно связанных с клетками (обычно с эритроцитами) неполных Ат с помощью антиглобулиновой с ки (А. с.). А. с., преципитируя неполные Ат, включает в этот процесс клетки носители,… … Словарь микробиологии

КУМБСА РЕАКЦИЯ - (по имени британского иммунолога R. R. A. Coombs, род. в 1921, синоним – антиглобулиновая проба) – серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто– и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки. При… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

РЕАКЦИЯ ТРАНСФУЗИОННАЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ - мед. Трансфузионная гемолитическая реакция (ТГР) гемолиз эритроцитов реципиента или донора (редко), возникающий при переливании крови и её компонентов. Реакции могут быть иммунной или неиммунной природы. Этиология и патогенез Иммунные реакции… … Справочник по болезням

- (R. R. A. Coombs, род. в 1921 г., англ. иммунолог) серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки; применяется в трансфузиологии, судебной медицине, а также… … Большой медицинский словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ - Кумбса реакция, серологическая реакция, позволяющая обнаружить неполные антитела, фиксированные на поверхности эритроцитов или содержащиеся в плазме крови. К. р. основана на применении антиглобулиновой сыворотки, получаемой путём гипериммунизации … Ветеринарный энциклопедический словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ - Используется для обнаружения моновалентных или так называемых неполных антител, в частности для анализа групп крови свиней и некоторых других животных … Термины и определения, используемые в селекции, генетике и воспроизводстве сельскохозяйственных животных

См. Кумбса реакция. (